Олигобациллярная лепра может быть диагностирована с помощью цифрового ПЦР-анализа

Проказа, или болезнь Хансена, является хроническим бактериальным заболеванием, вызываемым Mycobacterium leprae. Хотя она излечима и раннее принятие мер предотвращает большинство нарушений, всё же эта проблема остается важной для здравоохранения во всем мире.

Снижение количества M. leprae среди олигобациллярных (ОБ) пациентов отражает необходимость дальнейшей оптимизации методов диагностики проказы. Все больше сообщений показывают, что цифровая капельная полимеразная цепная реакция (ddPCR) является многообещающим инструментом для диагностики инфекционных заболеваний среди образцов с низким числом копий.

Ученые из Академии медицинских наук Шаньдун (Shandong Academy of Medical Sciences; Цзинань, Китай) зарегистрировали в общей сложности 112 пациентов с проказой, включая 68 мультибактериальных (МБ), 44 ОБ пациентов и 59 пациентов без проказы. Подтвержденные диагнозы были основаны на систематическом анализе и интеграции истории болезни пациентов, на клинических проявлениях, окрашивании мазка надреза кожи, гистологических исследованиях.

ДНК была извлечена из биоптатов кожи и M. marinum с использованием мини-комплектов ДНК QIAamp. Экстрагированная ДНК измерялась с помощью спектрофотометра NanoDrop 8000 и затем либо использовалась немедленно, либо хранилась при -80 °C. Количественную ПЦР (КПЦР) проводили в двух экземплярах с использованием системы ПЦР в реальном времени ABI Step One Plus. ddPCR была выполнена в двух экземплярах с использованием цифровой капельной системы ПЦР QX200.

Ученые сообщили, что специфичные для M. leprae повторяющиеся элементы RLEP и groEL (кодирующие молекулярный шаперон GroEL 65 кДа) были использованы для разработки анализа ddPCR путем систематического анализа специфичности и чувствительности. На основании определенного порогового значения анализ ddPCR показал более высокую чувствительность при обнаружении ДНК M. leprae у ОБ пациентов, по сравнению с КПЦР (79,5% против 36,4%), в то время как оба анализа имеют 100% чувствительность у МБ пациентов.

Авторы пришли к выводу, что дуплексный анализ ddPCR, нацеленный на RLEP и groEL, обеспечил высокочувствительный метод диагностики ОБ лепры. Они разработали и оценили дуплексный анализ ddPCR для диагностики проказы в образцах биопсии кожи от пациентов с проказой. Несмотря на высокую стоимость, ddPCR может быть многообещающим диагностическим инструментом для выявления ОБ лепры. Исследование было опубликовано 18 марта 2019 года в журнале "Общественная библиотека наук о забытых тропических болезнях" (Public Library of Science Neglected Tropical Diseases).

Ссылки по теме:
Академия медицинских наук Шаньдун