Метод проточной цитометрии оценен для сигнальных путей

Агрегация тромбоцитов является ключевым параметром при артериальном тромбозе, что приводит к инфаркту миокарда или ишемическому инсульту. У тромбоцитов есть несколько рецепторов, чувствительных к разным стимулирующим и лекарственным средствам, которые модулируют агрегацию с потенциально критическим клинико-патологическим значением.

Внутриклеточная передача сигналов тромбоцитов имеет большое значение для функции тромбоцитов, но ее трудно исследовать из-за небольшого размера и необходимости деликатной манипуляции тромбоцитами и по той причине, что эталонные методы требуют больших объемов клеток и подготовки образцов. В обычных клинических лабораториях часто используется проточная цитометрия.

Команда ученых, сотрудничающих с Университетской больницей Сент-Этьен (CHU Saint-Etienne, Hôpital Nord; Сент-Этьен, Франция), оценила степень фосфорилирования вазодилататор-стимулированных фосфопротеинов (vasodilator-stimulated phosphoprotein - VASP) у пациентов, госпитализированных по поводу некардиоэмболического ишемического инсульта, включенных в наблюдательное исследование. Пациенты, 12 мужчин и 7 женщин со средним возрастом 72 года, были включены в исследование в период с ноября 2014 года по сентябрь 2015 года и получали перорально регулярную суточную дозу 75 мг клопидогреля в течение как минимум пяти дней до того, как был взят анализ крови.

Анализ VASP проводился с использованием набора PLT VASP/P2Y12. Кроме того, из набора PerFix EXPOSE для лейкоцитов был разработан метод проточной цитометрии Platelet PerFix. Команда адаптировала инструкцию производителя для этого набора. Использовали фиксацию, пермеабилизацию, окрашивание и промывку реагентов набора. Каждый шаг проводился при комнатной температуре. Тромбоциты были проанализированы на цитометре Navios с использованием программного обеспечения Navios (Beckman-Coulter) в течение одного часа после завершения подготовки. Максимальная агрегация тромбоцитов, индуцированная аденозиндифосфатом (АДФ), измерялась с помощью световой трансмиссионной агрегометрии (Light Transmittance Aggregometry - LTA).

Исследователи обнаружили слабое соответствие между профилактикой при помощи АДФ PGE1-индуцированного цАМФ-активируемого фосфорилирования VASP и агрегацией, индуцированной АДФ, оцененной при помощи LTA. Они обнаружили достоверную корреляцию между набором PLT VASP/P2Y12 и набором PerFix EXPOSE. Набор PerFix EXPOSE также может быть полезен для мониторинга негативного воздействия ингибиторов тирозинкиназы второго поколения на тромбоциты, поскольку этот новый метод может обнаруживать низкий уровень клеток, отвечающих на клопидогрель. Впервые данное исследование было опубликовано онлайн 16 февраля 2018 года в журнале “Практическая лабораторная медицина” (Practical Laboratory Medicine).


Ссылки по теме:
Университетская больница Сент-Этьен