Для обнаружения антител при диагностике трахомы разработан иммунохроматографический анализ на тест-полосках

Трахома, возникающая вследствие рецидивирующей инфекции, вызванной бактерией Chlamydia trachomatis, является основной инфекционной причиной слепоты во всем мире. Ослепляющая трахома представляет собой проблему общественного здравоохранения, которую необходимо окончательно устранить к 2020 году.

Иммунохроматографический анализ на тест-полосках был разработан для обнаружения антител против иммунодоминантного антигена Pgp3 бактерии Chlamydia trachomatis, возбудителя урогенитальной хламидийной инфекции и трахомы глаз.

Ученые из IHRC, Inc. (Центры по контролю и профилактике заболеваний, Атланта, штат Джорджия, США) и их коллеги собирали образцы сыворотки крови от группы населения в Непале в 2000, 2002 или 2014 году по программе эпидемиологического надзора за развитием трахомы по данным серологического скрининга в результате массового применения лекарственных средств. В исследовании участвовали 432 непальца, возраст которых составлял от 1 года до 90 лет в группе. Также были собраны дополнительные образцы со всего мира, включая сухие капли крови, взятые у 1-9-летних жителей Танзании, из которых была извлечена сыворотка.

Иммунохроматографический анализ на тест-полосках был приготовлен с использованием конъюгированных реагентов, и реагенты захвата были приготовлены при оптимальных условиях. Для реагентов захвата 1.5 мг/мл белка Pgp3 и биотинилированного бычьего сывороточного альбумина были распределены соответственно на тестовую и контрольную линии из нитроцеллюлозной мембраны в количестве 0.1 мкл/мм, используя диспенсер IsoFlow (компания Imagene Technology, Ганновер, штат Нью-Гэмпшир, США). Проявляющий реагент, или конъюгат, был приготовлен путем соединения Pgp3 с частицами золота InnovaCoat Gold (компания Innova Biosciences, Кембридж, Великобритания).

Исследователи обнаружили, что оптимизация концентрации Pgp3 на тестовой линии и реагенты захвата, соединенные с коллоидным золотом, при использовании положительных контрольных проб показали самый сильный сигнал тестовой линии при использовании сочетания Pgp3-коллоидное золото и 1.5 мг/мл Pgp3 в качестве реагента захвата. Иммунохроматографический анализ на тест-полосках давал положительные сигналы с сывороткой и цельной кровью, но не с сухими каплями крови. Для сыворотки крови согласованность иммунохроматографического анализа на тест-полосках с мультиплексным анализом, не являющимся референсным, составляла 96%, специфичность при использовании сыворотки крови детей из неэндемичных областей составляла 100%, и межэкспертная согласованность была очень высокой. Для цельной крови согласованность иммунохроматографического анализа на тест-полосках с мультиплексным анализом составляла 81.5%, специфичность составляла 100%, и межэкспертная согласованность была также высокой. Иммунохроматографический анализ на тест-полосках был протестирован в полевых условиях и показал результаты, аналогичные тем, которые были получены при тестировании в лаборатории.

Авторы пришли к заключению, что полученные ими результаты демонстрируют успешную разработку иммунохроматографического анализа на тест-полосках для обнаружения антител против Pgp3 с надежным использованием в полевых условиях, что могло бы сделать тестирование на основе антител для наблюдения за развитием трахомы высокопрактичным, особенно после прекращения программ устранения трахомы. Исследование было опубликовано в журнале Journal of Immunological Methods, в выпуске за август 2016 года.


Ссылки по теме:
IHRC
Imagene Technology
Innova Biosciences