Метод агглютинации-ПЦР обеспечивает возможность сверхчувствительного обнаружения антител

Антитела представляют собой широко используемые биомаркеры для диагностики многих заболевай, и анализы, основанные на иммобилизации антигена на твердой фазе, включают большинство клинических платформ для обнаружения антител, но их проведение может оказаться невозможным в результате денатурации антигена и маскирования антигенной детерминанты.

Эти технические препятствия особенно представляют трудности при обнаружении антител, которые связывают нелинейные или конформационные антигенные детерминанты, такие как антиинсулиновые антитела у больных сахарным диабетом 1 типа и антитела к тиреоглобулину, связанные со злокачественными опухолями щитовидной железы.

Ученые из Калифорнийского университета в г. Беркли (штат Калифорния, США) и их коллеги разработали сверхчувствительный метод для обнаружения антител в жидкой фазе, названный обнаружением антител методом агглютинации – полимеразной цепной реакции (англ. antibody detection by agglutination-polymerase chain reaction, или ADAP). Антитела связываются и агглютинируют с конъюгатами искусственного антигена и ДНК, обеспечивая возможность лигирования нитей ДНК и последующее количественное определение с помощью количественной ПЦР. Прежние примеры использования близкого лигирования разделяют стандартный формат применения ДНК-конъюгированных антител, чтобы обнаружить интересующий определяемый компонент. Метод ADAP меняет ситуацию, используя ДНК-конъюгированный антиген для обнаружения антител.

Анализ использует свойственную антителам поливалентность, чтобы добиться эффекта непосредственной приближенности. Впечатляющий динамический диапазон метода ADAP, по всей видимости, связан со способностью антител привлекать антигены, и это дает основание предполагать, что поликлональные антитела превосходят по своим свойствам моноклональные. Этот механизм уникален для обнаружения антитела и для метода ADAP, и количественная ПЦР была выполнена как на системе обнаружения Bio-Rad CFX96, так и на Bio-Rad iQ5, использующих ПЦР в режиме реального времени (Bio-Rad Laboratories, Inc., Геркулес, штат Калифорния, США). Метод требует всего лишь незначительного количества образца крови пациента и является в 1,000 раз более чувствительным при обнаружении биомаркеров для рака щитовидной железы, чем используемый в настоящее время тест, одобренный государственными органами.

Авторы пришли к заключению, что метод ADAP открывает возможность выполнения всех трех типов тестов (полученных из генома нуклеиновых кислот, антигенов и антител) на объединенной платформе. Метод ADAP также может быть легко адаптирован к всевозможным новым ПЦР-платформам, предназначенным для тестирования на месте оказания медицинской помощи, чтобы обеспечить выполнение высокочувствительных анализов на антитела в жидкой фазе в условиях ограниченных ресурсов. На основании положительных качеств метода, функциональной простоты и эффективного использования имеющейся технологии прогнозируется, что метод ADAP обеспечит полезную аналитическую платформу для большого числа применений в медицинской практике и в научных исследованиях. Исследование было опубликовано 16 февраля 2016 года в журнале ACS Central Science.

Ссылки по теме:
University of California, Berkeley
Bio-Rad Laboratories Inc.