Революционная технология оценивает иммунный ответ

Тесты, позволяющие проводить определение и подсчёт антиген-специфических T-клеток, являются средствами, имеющими особо важное значение в оценке иммунных реакций и использовании функции T-клеток для лечения многочисленных болезней, включая рак.

Был разработан новый мультиплексный тест, который объединяет традиционные методы иммунологического контроля и определения последовательности набора иммунных рецепторов, чтобы позволить одновременно проводить определение T-клеток, специфичных к большому количеству антигенов.

Ученые компании Adaptive Biotechnologies (Южный Сан-Франциско, штат Калифорния, США) объединили 30 различных антигенов и определили 427 антиген-специфических клонотипов от пяти человек с частотой повторений всего один на миллион T-клеток. Идентифицированные клонотипы были проверены несколькими способами, включая повторяемость, конкордантность с клонотипами, встречающимися в публикациях, и высокий коэффициент корреляции с методом иммуноферментных пятен.

Антиген-специфические T-клетки были определены с использованием одного из двух методов: или связыванием декстрамера (dextramer binding), или применения CD137 для положительной регуляции после инкубации в течение ночи со смесями пептидов. Декстрамер-специфические T-клетки были определены с помощью выдерживания мононуклеарных клеток периферической крови с группой из восьми декстрамеров. Новое испытание назвали MIRA, что расшифровывается как “мультиплексное определение специфичности T-клеточного рецептора к антигену” (Multiplexed Identification of T cell Receptor Antigen specificity).

Результаты для четырех антигенов были получены раздельно для каждого донора методом иммуноферментных пятен. Метод иммуноферментных пятен измеряет общее количество антиген-специфических T-клеток, выделяющих особый цитокин. Если бы все антиген-специфические T-клетки выделяли этот цитокин, измеряемый с использованием метода иммуноферментных пятен, тогда результаты были бы аналогичны суммарной частоте повторений антиген-специфических клонотипов, идентифицированных с использованием MIRA. Ученые сравнили результаты анализа гамма-интерферона методом иммуноферментных пятен с суммарной частотой повторений антиген-специфических клонотипов от каждого донора. Отмечался высокий коэффициент корреляции между результатами обоих испытаний, и метод MIRA без задержки определял антиген-специфические клонотипы ниже 1 в 100,000 мононуклеарных клеток периферической крови, что ниже оценочных показателей предела обнаружения для метода иммуноферментных пятен, равного приблизительно 4 пятна на 100,000 мононуклеарных клеток периферической крови.

Харлан Робинс (Harlan Robins), доктор философии, главный научный сотрудник и соучредитель компании Adaptive Biotechnologies, сказал: “С появлением этой новой мультиплексной технологии у нас есть возможность определить специфичность антигена к последовательностям T-клеточных рецепторов в крупном масштабе. Объединение с наилучшей в своем классе технологией, соединяющей последовательности цепей T-клеточных рецепторов альфа и бета с высокой пропускной способностью, позволило нам получить инструменты, необходимые для эффективной идентификации функциональных иммунных рецепторов, которые могут привести к огромным продвижениям в открытии биомаркеров и улучшении лечения”.

Исследование было опубликовано 28 октября 2015 года в журнале Public Library of Science ONE.

Ссылки по теме:
Adaptive Biotechnologies