Автоматизированный гематологический анализатор подсчитывает стволовые клетки периферической крови

Количество введенного кластера клеток дифференциации CD34+, которые обычно находятся в пуповине и костном мозгу в виде гемопоэтических клеток, имеет решающее значение для успеха трансплантации стволовых клеток периферической крови (peripheral blood stem-cell transplantation - PBSCT).

Хотя в настоящее время способность считать клетки CD34+ зависит исключительно от проточного цитометрического анализа, сложность процедуры и стоимость реагентов, в том числе моноклональных антител, являются основными недостатками, которые могут быть преодолены с помощью автоматизированного гематологического анализатора.

Ученые из больницы Национального центра онкологических исследований (Токио, Япония) представили новый метод, основанный на гемолизе и химическом воздействии с последующим оптическим детектированием на основе проточной цитометрии, и провели исследование с использованием автоматического гематологического анализатора. Клетки, экспрессирующие CD34+ и гемопоэтические клетки-предшественники (hematopoietic progenitor cells - HPC) сравнивались по 76 гранулоцитарным колониестимулирующим факторам (G-CSF)-мобилизованной крови или образцам афереза, взятым от 18 здоровых доноров и 6 пациентов, перенесших аутологичную PBSCT.

Для измерения HPC была использована недавно запущенная модель автоматизированного гематологического анализатора серии XN (Sysmex Corporation; Кобе, Япония). Модель серии XN оснащена каналом белых клеток-предшественников (white precursor cell - WPC) для обнаружения незрелых клеток, таких как миелобласты и аномальные лимфоциты. Принцип измерения этого канала использует оптическую систему обнаружения и общую проточную цитометрию. В этом канале используются два реагента: лизирующий реагент, содержащий полиоксиэтиленовое неионогенное поверхностно-активное вещество, и красящий реагент, содержащий полиметиновый краситель. Клетки CD34+ выделяли с помощью магнитных наборов для разделения клеток MACS (Miltenyi Biotec; Бергиш-Гладбах, Германия).

Исследователи обнаружили сильную корреляцию между количеством HPC и клетками CD34+. Ожидаемое общее количество HPC в конечных продуктах, которые оценивали по HPC в продуктах предафереза периферической крови или промежуточных продуктах в процессе афереза, также хорошо коррелирует с общим количеством клеток CD34+ в конечных продуктах. Изменение HPC в периферической крови точно повторяло изменение клеток CD34+ во время мобилизации. Исследования с использованием иммуномагнитных шариков предположили, что большинство клеток CD34+ существовали в HPC, и наоборот.

Авторы пришли к выводу, что их новый способ подсчета HPC может быть выполнен без использования моноклональных антител на автоматизированном гематологическом анализаторе серии XN. Итоговый объем собранных клеток CD34+ может быть определен из общего количества HPC в конечных продуктах, а также из предафереза периферической крови и промежуточных продуктов в процессе афереза. HPC также может быть хорошим индикатором для измерения оптимального времени сбора стволовых клеток в периферической крови. Исследование было опубликовано 27 декабря 2013 года в “Международном журнале лабораторной гематологии”.

Ссылки по теме:
Больница Национального центра онкологических исследований
Sysmex Corporation
Miltenyi Biotec