Разработаны иммуноанализы на основе исследования мочи для диагностики висцерального лейшманиоза

Висцеральный лейшманиоз – тяжелая паразитарная болезнь, которая может привести к летальному исходу при несвоевременной постановке диагноза и лечении, при этом диагностические тесты, предлагаемые для обнаружения висцерального лейшманиоза, такие как аспирация костного мозга, являются инвазивными и болезненными, хотя и позволяют оценить ответ на терапию.

Пост-кала-азар кожный лейшманиоз с проявлениями на коже является потенциальным естественным резервуаром для распространения висцерального лейшманиоза, и паразитологическое исследование мазка содержимого язвы, наряду с клиническими симптомами, обычно используется для диагностики пост-кала-азар кожного лейшманиоза. Поэтому неинвазивный анализ, обладающий приемлемой чувствительностью и адаптированный к требованиям, мог бы стать ценным дополнительным средством в процессе лечения и контроля за течением болезни.

Специалисты по инфекционным заболеваниям в Индийском институте химической биологии (Колката, Индия) включили в исследование 186 участников в течение периода с марта 2011 года по июль 2016 года. Перед лечением взяты образцы мочи, полученные от 97 больных висцеральным лейшманиозом, которые были рассмотрены при паразитологическом исследовании и проведении диагностических экспресс-тестов rK39. Из данных 97 образцов 18 были получены для проведения лонгитюдного исследования в различные моменты времени. Образцы были также взяты у 75 представителей контрольной группы, и 14 образцов мочи, собранных у пациентов с пост-кала-азар кожным лейшманиозом, были подтверждены биопсией кожи или мазком содержимого язвы.

Команда ученых также выполнила твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), оптические плотности были определены при длине волны 492 нм. Исследователи выполнили дот-блот-анализ и приготовили нитроцеллюлозную мембранную индикаторную полоску с наличием тестовой и контрольной линий для визуальной диагностики заболевания. Аналогично анализу дот-блот, анализ с использованием индикаторных тест-полосок включает выдерживание образца мочи в термостате, за которым следует внесение античеловеческого иммуноглобулина G (IgG), конъюгированного с ферментом, и затем – хромогенного субстрата, включая промывку на каждом этапе. Темно-коричневые полоски как на тестовой, так и на контрольной линии показывают положительный результат анализа на висцеральный лейшманиоз, а одна полоска на контрольной линии означает отрицательный результат анализа.

Команда ученых обнаружила, что ELISA и индикаторные тест-полоски оказались очень эффективными для диагностики висцерального лейшманиоза и пост-кала-азар кожного лейшманиоза с использованием образцов мочи, таким образом они могут заменить существующие инвазивные методы диагностики. Тест с использованием индикаторных тест-полосок и пробы мочи является простым, чувствительным и, самое главное, неинвазивным методом, который может помочь не только в обнаружении случаев заболевания висцеральным лейшманиозом, но также и установить ответ на терапию. В силу вышесказанного, он может быть широко применен в качестве контроля хода лечения висцерального лейшманиоза, особенно в условиях ограниченности ресурсов. Исследование было опубликовано 14 октября 2016 года в журнале Public Library of Science Neglected tropical Diseases.

Ссылки по теме:
Indian Institute of Chemical Biology