Быстрый метод выявляет болезнь Крейтцфельда-Якоба в спинномозговой жидкости

Ранний и точный диагноз является давней проблемой в отношении различных заболеваний, связанных с нарушением структуры определённого белка, и это особенно важно при прионных заболеваниях человека.

Вибрационно-индуцированный конверсионный анализ в режиме реального времени (real-time quaking-induced conversion, RT QuIC) спинномозговой жидкости (СМЖ) и образцов, взятых из носа, представляет ценность для дифференцирования болезни Крейтцфельда-Якоба (БКЯ) от состояний, к ней не относящихся; по длительности такой анализ занимает более 2-5 дней.


Ученые из Национальных институтов здоровья (NIH; Гамильтон, штат Монтана, США) и их коллеги получили образцы спинномозговой жидкости от пациентов с возможной или вероятной болезнью Крейтцфельда-Якоба в момент отбора проб, а также от пациентов с другими неврологическими расстройствами, в том числе болезнью Альцгеймера, боковым амиотрофическим склерозом, атипичным паркинсонизмом, деменцией, дистонией и семью другими неврологическими расстройствами.

Анализы RT-QuIC проводились на образцах СМЖ. Реакционные смеси загружались в черный 96-луночный планшет с прозрачным дном, в реакционные смеси выполняли посев СМЖ до конечного объема реакционной смеси 100 мкл. Планшеты затем герметизировали и инкубировали в планшет-ридер BMG FLUOstar Omega (BMG LABTECH; Ортенберг, Германия; www.bmglabtech.com) при 42 °С или 55 °С в течение 55-90 часов с 60-секундными циклами вибрации и 60 секундами спокойствия для всей инкубации. Каждые 45 минут производились измерения флуоресценции тиофлавина Т при возбуждении на 450 ± 10 нм и эмиссии на 480 ± 10 нм.

Улучшенный анализ RT-QuIC выявляет позитивные образцы спинномозговой жидкости в течение от 4 до 14 часов с лучшей аналитической чувствительностью. Кроме того, анализ 11 БКЯ-пациентов показал, что если семеро были положительными при использовании предыдущих условий, то десять были положительными при использовании нового анализа. В этих и дальнейших анализах в общей сложности 46 из 48 образцов СМЖ от спорадических БКЯ-больных были положительными, в то время как все 39 не больных БКЯ были отрицательными, что дает 95,8% для диагностической чувствительности и 100% для специфичности.

Авторы пришли к выводу, что они заметно улучшили анализ RT-QuIC человеческой СМЖ, так что БКЯ-пациенты и лица, у которых нет БКЯ, могут быть разделены с повышенной чувствительностью в течение нескольких часов, а не дней. Эти улучшения должны позволить проводить гораздо быстрее и точнее практический анализ на БКЯ. В более широком плане исследование может стать прототипом для анализа неправильно упакованных белковых агрегатов, которые вызывают много серьезных амилоидных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, Паркинсона и таупатия. Первоначально исследование было опубликовано 20 января 2015 года в журнале mBio.

Ссылки по теме:
US National Institutes of Health
BMG LABTECH