多重定量检测方法检测多寄生现象

By LabMedica International staff writers
Posted on 27 Apr 2016

准确量化评估土源性蠕虫和原虫感染是解读这些寄生虫流行病学研究，以及监控大范围治疗效果和有效性研究的重要组成部分。
由于蠕虫感染的患病率和传播直接与感染的流行性和强度相关，这尤其需要使用改良的检测技术，如聚合酶链式反应（PCR）方法学，针对上述目的评估感染的强度。

图片A：Rotor-Gene 6000量化DNA（照片由Corbett Life Science提供）

图片B：Powersoil DNA分离试剂盒（照片由Mo Bio提供）。

由QIMR Berghofer Medical Research Institute（Herston，Australia）的科学家领带的一个国际科学家团队在农村社区中采集了共计680人的粪便样品：467份样品来自东帝汶，213份样品来自柬埔寨。从粪便样品中提取DNA，并使用第一款以蠕虫和原虫为靶点的两种多重实时聚合酶链检测试剂盒进行反应。样品接受硝酸钠浮选，以鉴别和量化土源性蠕虫（STH）卵，并进行硫酸锌离心浮选，检测寄生性原生虫病。
使用Powersoil DNA分离试剂盒（Mo Bio，Carlsbad，CA USA）提取DNA。提取的DNA接受两种五重实时PCR检测试剂盒进行反应。第一种试剂盒定量检测美洲钩虫、钩虫属（十二指肠钩虫、锡兰钩虫）、蛔虫属和毛首鞭形线虫；第二种试剂盒半定量检测痢疾变形虫、隐孢子虫、十二指肠贾第鞭毛虫和肠类圆线虫。Rotor-Gene 6000（Qiagen，Melbourne，Australia）用于所有PCR检测，设定为进行两种PCR反应。
使用多重PCR检测出的寄生虫患病率更高（hookworms检出率升高2.9倍、Ascaris检出率升高1.2倍、Giardia检出率升高1.6倍），寄生虫检测性能更优越，表现为检测出的寄生虫数量增加（一重：40.2%与38.1%，两重：30.9%与12.9%，三重：7.6%与0.4%，四重：0.4%与0%）。根据官方指南定义，虽然所有STH阳性样品经显微镜检查出的感染强度低，但是多重PCR检测的DNA载量结果却提示其感染强度较高。
作者得出结论，与显微镜检查相比，多重PCR除了具有更优越的灵敏度，能更准确的确定蛔虫、钩虫和贾第虫属，尤其是多寄生现象样品。多重PCR检测多寄生现象的性能优越，能更准确的确定感染强度，提示这种技术更适用于流行病学研究，并监控大范围干预试验。研究已发表于2016年1月28日的Public Library of Science Neglected Tropical Diseases（科学公立图书馆•被忽视的热带疾病）。

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QIMR Berghofer Medical Research Institute
Mo Bio
Qiagen