Выполнено сравнение микроскопического исследования и молекулярного анализа для диагностики шистосомоза

Стандартный тест, используемый в настоящее время для обнаружения Schistosoma mansoni на эндемичных территориях, представляет собой микроскопическое исследование кала, основанное на одном или более мазках кала, подготовленных по методу Като-Каца, однако этот тест зависит от опытности специалиста, проводящего исследование, и имеет недостаточную чувствительность.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в мультиплексном формате имеет некоторые преимущества перед микроскопией, обладая большей гибкостью, поскольку мультиплексная ПЦР может обнаружить все виды шистосом и другие виды гельминтов одновременно и независимо от времени, которое прошло после взятия кала для исследования.


Ученые из Медицинского центра Лейденского университета (Нидерланды) собрали международную команду, чтобы сравнить выполнение микроскопического исследования кала с высокоспецифичной ПЦР в режиме реального времени для обнаружения и количественного анализа специфической ДНК паразитирующего организма. Микроскопия и ПЦР были выполнены в сенегальской группе населения, состоящей из 197 человек, проживающей на территории с высоким уровнем распространения S. mansoni, и среди кенийских школьников из области со сравнительно низким уровнем распространения S. mansoni.

В Сенегале два образца кала и два образца мочи были собраны от каждого участника в следующие один за другим дни. Из каждого образца кала были подготовлены в двух экземплярах предметные стекла по методу Като-Каца с использованием 25 мг пробы для количественного определения яиц вида Schistosoma и качественного обнаружения геогельминтов Ascaris lumbricoides и Trichuris trichiura с помощью микроскопии. Мультиплексная ПЦР в режиме реального времени для обнаружения шистосом была выполнена на ДНК, извлеченной из образцов кала. Данная ПЦР ориентирована на характерную для шистосом нуклеотидную последовательность внутреннего транскрибируемого спейсера 2 (ITS2) S. mansoni, S. haematobium и S. intercalatum. Амплификация, обнаружение и анализ данных были выполнены с помощью системы CFX96 (версия 1.1) на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (компания Bio-Rad; Геркулес, штат Калифорния, США).

Несмотря на различия в эндемическом характере шистосом, ПЦР выполнялась очень похожим образом на обеих территориях; на 13–15% больше случаев инфекций диагностировалось при использовании ПЦР, если сравнивать с микроскопией одного образца кала. Даже когда использовались два-три образца кала для выполнения микроскопии, по методу ПЦР по одному образцу кала определялось больше случаев инфекций, особенно у людей со слабовыраженными инфекциями и среди детей из школ с низким риском. Низкий уровень распространения геогельминтов в обеих группах населения был подтвержден с помощью дополнительного проведения мультиплексной ПЦР.

Авторы пришли к заключению, что ПЦР, основанная на ITS2, была более чувствительной, чем стандартный метод микроскопии при определении видов шистосом. Она была бы особенно полезна для обнаружения S. mansoni в областях с низким уровнем распространения и при последующем наблюдении, в силу этого улучшила бы программы контроля шистосомоза, эпидемиологическое исследование и проверку качества микроскопии. Кроме того, метод может быть дополнен другими мультиплексными ПЦР в режиме реального времени, чтобы обнаруживать широкий спектр гельминтов и, таким образом, увеличить эффективность существующего комплексного контроля и стратегий устранения забытых тропических болезней. Исследование было опубликовано 28 июля 2015 года в журнале Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

Ссылки по теме:
Leiden University Medical Center
Bio-Rad