Молекулярный количественный анализ, основанный на использовании сухих реагентов, облегчает диагностику язвы Бурули

Язва Бурули представляет собой забытое тропическое заболевание, причиной которого являются Mycobacterium ulcerans, вызывающие кожное заболевание, которое является третьей наиболее распространенной микобактериальной болезнью, при этом важное значение имеет быстрая диагностика и лечение.

Считается, что полимеразная цепная реакция (ПЦР) является самым чувствительным методом для лабораторного подтверждения язвы Бурули, но эта техника остается дорогой и включает реактивы, непригодные для использования в тропических странах, где существуют проблемы с условиями хранения, препятствуя развитию надежной диагностики методом количественной ПЦР.


Ученые из различных учебных заведений Франции, включая университет Анже (Франция), сравнили эффективность трех различных сухих смесей для проведения количественной ПЦР, которые были высушены сублимацией с различными концентрациями криопротекторов, со свежеприготовленной смесью для обнаружения стандартного ряда концентраций ДНК M. ulcerans. Команда оценила термическую стойкость сухих смесей, сравнивая их со свежеприготовленной смесью после нагревания. Также была произведена оценка одной из сухих смесей в полевых условиях при анализе 93-х проб пациентов с подозрениями на язвы Бурули.

Для валидации сухой смеси в полевых условиях выбранная сухая смесь была оценена с помощью 48-ми мазков, 27-ми образцов ткани и 18-ти биоптатов, полученных тонкоигольной аспирацией, взятых у 93-х пациентов с подозрением на язву Бурули. Амплификация ДНК и обнаружение были выполнены с использованием термоциклера Chromo4 (компания Bio-Rad; Геркулес, штат Калифорния, США). Сухая смесь оказалась очень устойчивой к воздействию высокой температуры, имела схожую со свежеприготовленной смесью чувствительность и эффективность и была проще в использовании по сравнению со свежеприготовленной смесью. Исследователи определили, что 55 проб были положительными на присутствие ДНК M. ulcerans и 38 оказались отрицательными.

Авторы пришли к заключению, что сухие смеси для проведения количественной ПЦР подходят для использования при диагностике инфекции, вызванной M. ulcerans в эндемичных странах. Простота использования этой смеси позволяет необученному персоналу выполнять диагностические тесты с ограниченным риском заражения. Возможность использования этой смеси либо в форме ампул, либо в форме полосок обеспечивает гибкие возможности для организации работы с малым или большим количеством образцов. Количественная ПЦР с использованием сухих смесей реагентов может использоваться в качестве надежного инструмента для диагностики язвы Бурули в полевых условиях. Исследование было опубликовано 1 апреля 2015 года в журнале Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

Ссылки по теме:
University of Angers
Bio-Rad