Для диагностирования туберкулеза разработан высокочувствительный молекулярный тест

Быстрое и точное обнаружение микобактерий туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis) крайне важно для диагностики туберкулеза, однако традиционные диагностические методы имеют ограниченную чувствительность и специфичность или требуют много времени.

Новый высокочувствительный тест, основанный на амплификации нуклеиновых кислот, объединяет вложенную полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и ПЦР в режиме реального времени в одной пробирке; он был разработан для обнаружения микобактерий туберкулеза и использует преимущества двух технологий ПЦР, включая ПЦР в режиме реального времени.


Ученые медико-биологической лаборатории при Университете Ёнсе (Вонджу, Республика Корея) и их коллеги собрали образцы слюны 167-ми людей, имеющих активный туберкулез, и 108-ми здоровых людей. Образцы слюны были доведены до жидкого состояния и подверглись обработке; осадок был переведен в суспензию в стерильном физиологическом растворе и использовался для приготовления мазка, посева в питательной среде Левенштейна-Йенсена и извлечения ДНК. Присутствие кислотоустойчивых бактерий (КУМ) было исследовано с помощью оптического микроскопа, а результаты анализа мазков КУМ были классифицированы.

Начальная идентификация микобактерий туберкулеза подтверждена с использованием иммунохроматографического теста SD TB Ag MPT64 (корпорация SD Bioline; Йонгин, Корея) и набора для молекулярной диагностики REBA Myco-ID (корпорация M&D; Вонджу, Корея). Ученые разработали однопробирочную вложенную ПЦР в режиме реального времени, чтобы проводить две последовательные реакции с двумя группами праймеров и параллельными пробами для последовательности IS6110 микобактерий туберкулеза в одной закрытой пробирке.

Испытания ПЦР в режиме реального времени были выполнены и подтверждены с помощью системы для проведения быстрой ПЦР в режиме реального времени Applied Biosystems 7500 (Фостер-Сити, штат Калифорния, США).

Минимальные пределы обнаружения IS6110 ПЦР в режиме реального времени составляли 100 фг/мкл, а для IS6110 однопробирочной вложенной ПЦР в режиме реального времени - 1 фг/мкл ДНК микобактерий туберкулеза. AdvanSure TB/NTM ПЦР в режиме реального времени (компания LG Life Science; Сеул, Корея), IS6110 ПЦР в режиме реального времени и однопробирочная вложенная ПЦР в режиме реального времени показали 100%-ную чувствительность и 100%-ную специфичность к клиническим штаммам микобактерий туберкулеза и штаммам нетуберкулезных микобактерий (nontuberculous mycobacteria или NTM). В сравнении чувствительность AdvanSure TB/NTM ПЦР в режиме реального времени составляла 91% (152/167), 94,6% (158/167) для одной IS6110 ПЦР в режиме реального времени и 100% (167/167) для однопробирочной вложенной ПЦР в режиме реального времени.

Авторы пришли к заключению, что новый эффективный, высокочувствительный метод ПЦР – однопробирочная вложенная ПЦР в режиме реального времени, – предназначающийся для последовательности IS6110, которая была разработана для обнаружения микобактерий туберкулеза, использует преимущества вложенной ПЦР и ПЦР в режиме реального времени. Однопробирочная вложенная ПЦР в режиме реального времени показала лучшую чувствительность в сравнении с традиционной ПЦР в режиме реального времени и AdvanSure TB/NTM ПЦР в режиме реального времени, коммерческим набором для проведения ПЦР в режиме реального времени для диагностики туберкулеза. Исследование было опубликовано 30 августа 2014 года в журнале Diagnostic Microbiology and Infectious Disease.

Ссылки по теме:
Yonsei University
SD Bioline Inc.
M&D Inc.