Разновидности кожного лейшманиоза идентифицируются методом масс-спектрометрии

Кожный лейшманиоз вызван несколькими видами Leishmania (лейшмании), которые связаны с переменными результатами до и после лечения, а заключение о выборе оптимального метода лечения основано на точной идентификации инфицирующих видов.

Существующие методы отнесения изолятов лейшмании к определенному типу относительно сложные и медленные, и поэтому начальное решение о выборе лечения является, как правило, предварительным, инфицирующие виды подозреваются на эпидемиологических и клинических основаниях. Простой метод классификации выращенных изолятов облегчил бы управление ходом заболевания.


Ученые из Университета Пьера и Марии Кюри (Париж, Франция) выполнили паразитологическую диагностику и анализ соскоба очага поражения, взяли материал ткани путем проведения биопсии или аспирации с последующим непосредственным исследованием мазков, окрашенных по Гимзе, гистологических анализов, срезов ткани, окрашенных по Гимзе, посева на микроорганизмы или полимеразной цепной реакцией (ПЦР). Исследователи также проанализировали сгустки промастигот 46-ти штаммов, выращенных в монофазной питательной среде, включая 20 выращенных за короткий срок штаммов путешественников из Франции (19 с кожным лейшманиозом и одного с индийским висцеральным лейшманиозом); клинические штаммы были проанализированы параллельно с мультилокусным секвенированием-типированием.

Сгустки промастигот были проанализированы с применением технологии время-пролётной ионизации лазерной десорбцией с использованием матрицы (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight, или MALDI-TOF) и выполнены на масс-спектрометре BrukerAutoflex I MALDI-TOF (компания Bruker-Daltonics, Бремен, Германия). Автоматический анализ древовидной диаграммы генерирует классификацию штаммов, сопоставимую со справочным определением видов, основанную на мультилокусном секвенировании-типировании или 70 кДа секвенировании гена белка теплового шока (heat shock protein, или hsp70). Спектроскопия, основанная на очень простом, независящем от базы данных анализе спектров показала, что взаимоисключающее присутствие двух пар пиков дифференцирует штаммы, проанализированные стандартными методами, чтобы отнести их или к подроду Viannia, или к Leishmania, и так в пределах каждого подрода присутствие или отсутствие нескольких пиков позволило устанавливать различия на уровне комплексов видов.

Авторы пришли к заключению, что анализ штаммов лейшмании, выращенных в питательной среде, с использованием метода масс-спектрометрии делает возможным быстро и просто проводить классификацию на уровне комплекса видов в соответствии с эталонными методами – такой способ потенциально полезен для управления решением при выборе лечения пациентов с кожным лейшманиозом. Интуитивная расшифровка спектров была подходящей для обеспечения тесных взаимодействий между паразитологами и клиницистами. Исследование было опубликовано 5 июня 2014 года в журнале Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

Ссылки по теме:
University Pierre et Marie Curie
Bruker-Daltonics