为阴道毛滴虫开发的LAMP测定

By LabMedica International staff writers
Posted on 19 Sep 2014

一种环介导恒温扩增(LAMP)测定产品靶向重复的DNA品种特异的序列，其设计用途是检测阴道毛滴虫。

阴道毛滴虫感染最常用的诊断化验有：湿片显微镜检、培养和最近使用生殖道拭子、尿液样本或精液样本的核酸扩增检验(NAAT)。培养是诊断阴道毛滴虫的金标准，尽管其灵敏度可能和显微镜检一样低，需要至少孵育一周且每天做显微镜检才能达到最佳效果。

图片：一只阴道毛滴虫滋养体的扫描电子显微图像(SEM)（图片蒙Dennis Kunkel博士惠赐）。

位于马尼拉的菲律宾大学的寄生虫学家收集了16份生殖道拭子和两份尿样，样本来自前来生殖健康中心就诊的妇女。通过离心制成对数中期无菌阴道毛滴虫培养物（107毛滴虫/毫升）和1毫升等分的临床样本。通过聚合酶链反应(PCR)检查所有样本，看是否存在阴道毛滴虫。

基于高度重复的两千碱基对(2-Kbp)阴道毛滴虫DNA片段设计特异于阴道毛滴虫的LAMP引物。用凝胶电泳评估LAMP产物的浊度，并加入英杰公司(Carlsbad, CA, USA)的SYBR Safe DNA凝胶染料，在UVP公司(Upland, CA, USA)的紫外透照器下显像。自然光下颜色从橙色变成粉红或者在紫外透照器下从暗色变成荧光信号表示阳性反应。

16份生殖道拭子样本中的15份PCR结果为阴性，两份尿液样本结果也为阴性。把所有的阴性样本混为一体，用于做分析灵敏度评估时掺杂。掺杂的生殖道拭子样本的结果说明LAMP方法的检测限是100毛滴虫/毫升，采用的手段是凝胶电泳、浊度或加入SYBR Safe，而PCR的检测限是103毛滴虫/毫升。阴道毛滴虫LAMP与口腔毛滴虫和人五毛滴虫等密切相关的毛滴虫以及溶组织内阿米巴、白色念珠菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌等其它肠道微生物和泌尿生殖道微生物的DNA提取物不发生交叉反应。

该研究的论文发表于2014年7月号的《诊断微生物学与传染病》(Diagnostic Microbiology and Infectious Disease)杂志。作者总结说，阴道毛滴虫LAMP测定是检测最常见的可治愈性传播感染——毛滴虫病的简单、快速、灵敏且特异的方法。这一高效而经济的NAAT极其有望准确诊断和大规模监控、筛查和控制护理点和资源有限场合的毛滴虫病。

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菲律宾大学
 英杰公司
 UVP