Диагностирование лепры с помощью молекулярных технологий

Классический инструментарий для диагностики лепры основан на бациллярных подсчетах и гистопатологии, но данные методы сталкиваются с препятствиями, особенно при необходимости отличия латентной инфекции от активного заболевания и диагностировании малобациллярных клинических форм.

Серологические тесты и анализ секреции гамма-интерферона IFN- γ (IGRA), которые используют гуморальный и клеточный иммунный параметры также применяются, но последние результаты показывают, что количественная полимеразная цепная реакции (кПЦР) является одной из ключевых техник за счет более высокой чувствительности и специфичности.


Ученые из института Освальдо Круз (Instituto Oswaldo Cruz, Рио-де-Жанейро, Бразилия) провели оценку различных молекулярных анализов, используемых в настоящее время для обнаружения Mycobacterium leprae, возбудителя лепры. Имеющиеся достижения, касающиеся структуры и функции генома M. Leprae, привели к разработке специфических анализов на основе ПЦР амплификации гена для диагностики лепры и мониторинга бытовых контактов.

Некоторые из полученных результатов показывают, что для извлечения, очистки и амплифицирования ДНК M. leprae, рибонуклеиновой кислоты (РНК) или обоих могут быть использованы коммерческие наборы. Образцы также могут быть легко сохранены с помощью ускоренной технологии в 70%-ном этаноле для анализа карт нуклеиновых кислот (FTA) (Whatman, Мейдстон, Великобритания) с целью выявления ДНК M. leprae. Независимо от того, использовалась ли в методе обнаружения обычная технология или ПЦР в реальном времени, меньшее количество продуктов ПЦР давало лучшую эффективность амплификации ДНК, выделенной из тканей, фиксированных формалином или этанолом, либо свежих тканей. Фактически, важным шагом вперед была ПЦР-технология в режиме реального времени.

В то время как ПЦР-диагностика не является необходимой для лепроматозных пациентов с высокой бактериальной нагрузкой и большим количеством поражений, она оказывает чрезвычайно большую помощь при диагностике в случаях клинических проявлений с весьма ограниченным числом бацилл M. leprae (олигобациллярной) и трудных для диагностики пациентов. Обнаружение ДНК M. leprae в разных образцах при бытовых контактах с больным лепрой является очень многообещающим. Хотя положительный результат ПЦР не является достаточным для установления причинно-следственной связи с исходом заболевания, количественная оценка, обеспечиваемая кПЦР, способна явно определить повышенный риск развития заболевания и может предупредить врачей о необходимости более точно отслеживать такие контакты или даже определять правила для химиопрофилактики.

Авторы пришли к выводу, что общая, экстенсивная оценка анализов ПЦР в полевых исследованиях показала, что ПЦР-анализы на основе ДНК могут быть 100% специфичными, в то время как чувствительность лежит в диапазоне от 34% до 80% у пациентов с малобациллярными формами до 90% и более у больных с мультибациллярной формой заболевания. Было подтверждено, что ПЦР представляет особенную ценность при диагностике сложных случаев, таких как чисто нервная проказа, олигобациллярность и больные с атипичной клинической картиной и гистологическими особенностями, совместимыми с лепрой. Исследование было опубликовано 10 апреля 2014 года в журнале Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

Ссылки по теме:
Instituto Oswaldo Cruz
Whatman