用快速比色测定量化尿素酶活性

By LabMedica International staff writers
Posted on 04 Dec 2013

研究人员比较了一种新颖的高通量比色尿素酶活性测定与奈斯勒方法，新方法用酚红确定尿素酶活性。

这种方法快速、灵敏、容易、经济，不使用任何有毒的化学试剂，极大缩短了样本处理时间，支持实时研究。

图片：基于单色器的Synergy MX多模式酶标仪（图片蒙BioTek公司惠赐）

美国德克萨斯州休斯顿大学的科学家确定了七种尿素酶阳性(+)菌和两种尿素酶阴性(−)菌的尿素酶活性，这些细菌来源于多样的环境。将所有培养物在其特定的生长条件下孵育24小时，离心机(INNOVA 44, New Brunswick Scientific Co.; Enfield, CT, USA)转速设为150 rpm。然后把细菌细胞在600纳米处的光学密度调节到0.5。

将所有细菌的悬液加入斯图尔特肉汤，分成三份放入平底96孔微孔板，用BioTek公司(Winooski, VT, USA)的Synergy MX微滴定酶标仪每隔30分钟在430纳米和560纳米处读数，连续读取24小时。为了用这种新方法量化尿素酶活性，研究人员根据吸收数据计算反应率，然后基于尿素酶的标准曲线与尿素酶活性建立关联。他们比较了这种方法的结果与标准奈斯勒方法的结果。

两种方法的测量值相关但并不相同。奈斯勒方法需要在测量酶活性前收集并制备样本，但新方法不需要，这可以解释结果的细微差别。此外，研究人员发现滤过影响酶活性，这也许是两种结果之间差异的另一个可能原因。

该研究的论文发表于2013年10月5日的《微生物学方法杂志》(Journal of Microbiological Methods)。作者总结说，新方法具有高通量，分析处理步骤更少，检查时间更短。这些特征使其能很好地替代奈斯勒方法，快速量化和筛查尿素酶活性。

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美国德克萨斯州休斯顿大学
New Brunswick Scientific Co
BioTek