Анализы высвобождения цитокинов могут использоваться для обнаружения лейшманиоза у реципиентов трансплантатов

Анализы высвобождения цитокинов использовались, чтобы определить распространение инфекции, вызванной Leishmania infantum, среди реципиентов трансплантатов паренхиматозных органов, живущих в регионах, где микроорганизм является эндемическим вследствие вспышки заболевания.

Испания имеет один из самых больших в мире фондов доноров органов и является мировым лидером с точки зрения числа пересадок, которые выполняются в стране, но наблюдающаяся в данный момент вспышка лейшманиоза в Фуэнлабраде, в юго-западной области провинции Мадрид, включала 600 клинических случаев с конца 2009 года, уровень распространения составлял 0.2%.


Ученые из Института здоровья имени Карла III (Мадрид, Испания) включили в исследование 63 реципиента трансплантатов паренхиматозных органов (почек, печени и сердца), проживавших в городе Фуэнлабраде, возраст которых составлял 18 лет или старше, которым были проведены операции по трансплантации между 2005 годом и 2013 годом. Пятьдесят семь участников клинического исследования прежде не сталкивались со случаями заражения висцеральным лейшманиозом или сходной симптоматикой и шесть были вылечены от висцерального лейшманиоза.

Экстракт антигена Leishmania infantum был подготовлен из промастиготной формы стационарной фазы культур паразитических организмов. Мононуклеарные клетки периферической крови были выделены с помощью разделения на центрифуге по плотности, собранные клетки были выращены в питательной среде RPMI-1640. Пролиферация клеток была изучена путем включения бромдезоксиуридина с использованием комплекта Biotrak для пролиферации клеток методом твердофазного иммуноферментного анализа (подразделение Life Sciences компании GE Healthcare; Литтл Чалфонт, Великобритания). Надосадочные жидкости культуры клеток in vitro были собраны и хранились при -20 °C для количественного определения цитокинов. Цитометрический количественный анализ был выполнен с помощью BD Cytometric Bead Array Human Flex Set, данные были получены с использованием проточного цитометра FACSCalibur (компания Becton Dickinson Biosciences, Франклин Лейкс, штат Нью-Джерси, США).

Семнадцать участников исследования (12 не зараженных висцеральным лейшманиозом и 5 вылеченных от висцерального лейшманиоза) продемонстрировали очевидную лимфопролиферативную реакцию на растворимый антиген лейшмании. Стимуляция культур мононуклеарных клеток периферической крови или цельной крови с помощью растворимого антигена лейшмании привела к выработке различных комбинаций цитокинов, что, вероятно, поможет подтверждать заражение лейшманиозом или выздоровление от висцерального лейшманиоза и поможет препятствовать тому, чтобы вылеченные пациенты снова заболели этим серьезным недугом. Результаты показали, что исследования на клеточно-опосредованный иммунитет крайне важны для обнаружения воздействия L. infantum, поскольку одних только серологических исследований недостаточно. Это особенно актуально, когда пытаются обнаружить наличие признаков воздействия у людей с ослабленным иммунитетом, которые наиболее подвержены риску заболеть лейшманиозом после заражения или наступления рецидива заболевания после лечения висцерального лейшманиоза.

Авторы пришли к заключению, что их результаты подчеркнули необходимость использования тестов, которые обнаруживают клеточно-опосредованный иммунитет при проведении обследования людей, не проявляющих симптомы заболевания, в областях, где широко распространен лейшманиоз. Они также показывают, что анализы культур мононуклеарных клеток периферической крови и/или цельной крови могут использоваться, чтобы обнаруживать выработку цитокинов в качестве маркера инфекционного заболевания. Продуцирование интерферона гамма (IFN-γ), фактора некроза опухолей альфа (TNF-α), гранзима В, интерлейкина 5 (IL-5) и интерлейкина 10 (IL-10) мононуклеарными клетками периферической крови, стимулированными растворимым антигеном лейшмании, и IFN-γ, TNF-α и интерлейкина 2 (IL-2) периферической кровью, стимулированной растворимым антигеном лейшмании, могло бы использоваться для проверки воздействия лейшмании, особенно для пациентов, подверженных индуцированной иммунодепрессии. Исследование было опубликовано 23 октября 2015 года в журнале Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

Ссылки по теме:
Instituto de Salud Carlos III
General Electric Healthcare Life Sciences
Becton Dickinson Biosciences