Новый метод, основанный на проточной цитометрии, анализирует тельца Гейнца

 Тельца Гейнца представляют собой включения в эритроцитах, которые образуются из молекул денатурированного гемоглобина и являются очень чувствительным индикатором оксидативного стресса in vivo. Также сообщалось об образовании телец Гейнца у пациентов при хронической печёночной недостаточности и альфа-талассемии.

Обычно использовались оптические микроскопы для наблюдения за специально окрашенными тельцами Гейнца, которые можно было заметить в виде сферических включений на периферии эритроцитов. Однако микроскопическое исследование телец Гейнца занимает много времени, является трудоемким и обладает низкой чувствительностью.


Ученые из Университета имени короля Чулалонгкорна и их коллеги собрали образцы цельной крови пациентов с дефицитом глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы (Г-6-ФД) и здоровых добровольцев. Группа людей с дефицитом Г-6-ФД включала пациентов, которым ранее был поставлен данный диагноз. Эти пациенты были практически здоровы, и их возраст варьировался от 25 до 45 лет, при этом ни один никогда не испытывал острый гемолитический криз, не страдал от лихорадки, воспаления или инфекции.

Отмытые эритроциты крови подвергли инкубации в растворе ацетилфенилгидразина при 37 °C. После инкубации в течение одного часа тельца Гейнца были подсчитаны под оптическим микроскопом при увеличении в ×100. Активность фермента Г-6-ФД была определена с использованием специализированного комплекта. Активность фермента вычислялась с помощью терморегулируемого спектрофотометра путем измерения изменения уровня спектральной поглощательной способности при длине волны 340 нм. Эритроциты, содержащие тельца Гейнца, были исследованы с использованием цитометра FACSCanto II.

Исследователи обнаружили, что в эритроцитах, обработанных ацетилфенилгидразином, образовывались тельца Гейнца, испускающие флуоресценцию широкого спектра, которая могла быть обнаружена с помощью проточной цитометрии. Максимальная эмиссия флуоресценции наблюдалась через 45 минут после инкубации с ацетилфенилгидразином. Кроме того, испускаемая флуоресценция была стабильна в течение по крайней мере 72 часов. Проточный цитометр может обнаружить эритроциты, содержащие тельца Гейнца, даже если бы они составляли всего 0.1% всей популяции эритроцитов. Кроме того, процентное содержание и количество эритроцитов, содержащих тельца Гейнца, у пациентов с дефицитом Г-6-ФД и здоровых доноров показало среднее значение ± среднеквадратичное отклонение, равное 68.9 ± 27.5, в сравнении с 50.9 ± 28.6 и 96,014 ± 35,732 клеток/мкл в сравнении с 74,688 ± 36,514 клеток/мкл.

Автор пришел к заключению, что тельца Гейнца под воздействием ацетилфенилгидразина испускают флуоресценцию и эта флуоресценция может быть исследована c использованием проточной цитометрии. Это исследование наводит на мысль о потенциальном использовании разработанного метода для изучения образования телец Гейнца в клинических образцах. Исследование было опубликовано 16 января 2017 года в “Международном журнале лабораторной гематологии”.