Автоматизирована процедура световой трансмиссионной агрегации тромбоцитов

Агрегация тромбоцитов обычно измеряется с помощью световой трансмиссионной агрегометрии (light transmission aggregometry - LTA), при которой увеличение в пропускании света через перемешиваемую суспензию тромбоцитарно-обогащенной плазмы (ТОП) контролируется как скопление тромбоцитов.

Оценка агрегации тромбоцитов к ряду агонистов, включая аденозиндифосфат (АДФ), адреналин, коллаген, арахидоновую кислоту и ристоцетин, занимает центральное место в исследовании нарушений функции тромбоцитов, но осуществляется только в нескольких специализированных лабораториях гемостаза.


Гематологи на Университетского колледжа Лондона (Великобритания), совместно с коллегами из Японии и Франции, получили образцы крови от 14 здоровых субъектов, которым не были назначены никакие лекарства или которые занимались самолечением с нестероидными противовоспалительными препаратами, и от 2 лиц, принимавших клопидогрел – антиагрегант, используемый для ингибирования образования тромбов. Агрегацию тромбоцитов проводили путем изучения влияния скорости мешалки реакционной кюветы и числа тромбоцитов в ТОП с помощью следующих агонистов: АДФ, адреналина, коллагена, ристоцетина и арахидоновой кислоты. Реакции агрегации тромбоцитов измеряли с помощью агрегометра AggRAM (Helena Biosciences Europe; Гейтсхед, Великобритания), который был использован в качестве эталонного прибора.

Исследователи продублировали исследование агрегации тромбоцитов с помощью анализатора CS-2000i (Sysmex Corporation; Кобе, Япония) с теми же агонистами. CS-2000i является открытой аналитической системой – это означает, что протоколы испытаний и реагенты могут быть определены пользователем. Для этого исследования, для наиболее часто используемых агонистами тромбоцитов, были определены протоколы испытаний при варьировании только реагентов/концентраций. Эти протоколы упростили формирование измеренных необработанных данных по пропусканию света при строго контролируемых условиях, включая объем пробы, инкубационный период, объем реагента, скорости мешалки реакционной смеси и периода времени, в течение которого контролировали реакционную смесь.

Скорость мешалки реакционной кюветы CS-2000i, позволяющая оказывать влияние на чувствительность реакции, была оптимизирована до 800 оборотов в минуту (RPM). Не было обнаружено клинически значимых изменений в ответ агрегации, когда число тромбоцитов в тромбоцитарно-обогащенной плазме было в передах от 150 до 480×10⁹/л, но при меньших значениях произошли изменения в максимальной амплитуде (МА) и наклоне. Дозозависимый эффект с каждым из агонистов был сопоставим между CS-2000i и агрегометром AggRAM и нормальными субъектами, получающими антитромбоцитарные препараты. Неточность агрегирования была схожа на обеих системах CS-2000i и AggRAM, с коэффициентом вариации от 2 до 5 мкм МА АДФ, а наклон изменялся в пределах от 3 до 12%.

Авторы пришли к выводу, что их данные показали, что CS-2000i сравнима с автономным агрегометром, хотя CS-2000i имеет преимущества технологии испытания с выносом, а также требует на 44% меньше объема образца, чем AggRAM. Исследование было опубликовано 13 июля 2014 в “Международном журнале лабораторной гематологии” (International Journal of Laboratory Hematology).

Ссылки по теме:
Университетский колледж Лондона
Helena Biosciences Europe
Sysmex Corporation