Ферментный анализ на пропитанной фильтровальной бумаге выявляет болезнь Краббе

Болезнь Краббе (БК) является наследственной лизосомной болезнью накопления (LSD), вызываемой дефицитом галактоцереброзидазы (GALC), и характеризуется тяжелой и прогрессирующей лейкодистрофией с наступлением смерти часто в пределах одного года жизни.

Образцы высушенной крови на фильтровальной бумаге (DBFP) все чаще используются для анализа лизосомальных ферментов, и некоторые из лизосомальных ферментов не могут быть проверены на образцах DBFP с помощью флуорометрическиех анализов, в том числе GALC, гепаран-сульфамидаза (heparan-sulfamidase) и некоторые другие.


Медицинские генетики из больницы de Clínicas de Porto Alegre (Бразилия) получили лейкоциты от здоровых людей и подтвердили диагноз пациентов с БК. Образцы фильтровальной бумаги с высушенными лейкоцитами (DLFP) были подготовлены разбавлением осадка лейкоцитов в дистиллированной воде, и раствор был смешан и обработан ультразвуком в ледяной ванне на Misonix Sonicator XL2020 (Qsonica; Ньютаун, штат Коннектикут, США). После выдерживания в термостате с подходящими подложками надосадочная жидкость измерялась на спектрофлуорометре SpectraMax M2 (Molecular Devices; Саннивейл, штат Калифорния, США).

При сопоставлении активности GALC в DLFP и соответствующих им образцах лейкоцитов можно было увидеть тесную корреляцию в соответствующих группах БКД. Здоровая контрольная группа показала более высокие значения активности в DLFP, в какой-то степени возможно из-за удержания белка в фильтровальной бумаге в процессе разбавления. Исследователи не визуализировали этот эффект в образцах БК вероятно потому, что флуоресценция этих образцов была очень низкой. Тем не менее анализ в DLFP позволил правильно определить пациентов с БК во всех случаях.

Авторы пришли к выводу, что анализ GALC на DLFP является надежным и эффективным методом идентификации БК. Так как подготовка образца является вполне реализуемой в стандартных биохимических лабораториях и легка в транспортировке, это может позволить пациентам, проживающим в отдаленных районах, быть обследованными и диагностированными. Исследование было опубликовано 1 января 2015 года в журнале Clinica Chimica Acta.

Ссылки по теме:
Hospital de Clínicas de Porto Alegre
Qsonica
Molecular Devices