Простатспецифический антиген сыворотки измерен методом тандемной масс-спектрометрии

Выявление простатспецифического антигена (ПСА) при анализе крови широко используется для определения и мониторинга заболеваний простаты, и многие клиницисты предполагают, что все методы анализов дают по существу аналогичные результаты, хотя различия все же существуют.

ПСА представляет собой гликопротеин с молекулярной массой 34 кДа с химотрипсиноподобной активностью фермента, которая циркулирует как в свободной форме, так и в комплексе с различными ингибиторами фермента, в том числе антихимотрипсином и α2-макроглобулином. Простатспецифический антиген, связанный с α2-макроглобулином, не обнаруживается доступными на современном рынке иммунологическими ПСА-анализами.


Ученые из Медицинского колледжа при Клинике Майо (Mayo Clinic College of Medicine, Рочестер, штат Миннесота, США) разработали стратегию использования масс-спектрометрического (МС) анализа для измерения концентрации ПСА, который измеряет только иммунореактивные формы. Простатспецифический антиген экстрагировали из сыворотки с использованием антител, направленных к различным эпитопам ПСА. Сочетание трех моноклональных антисывороток анти-ПСА, которые направлены на различные эпитопы ПСА, использовалось для иммунного экстрагирования ПСА из сыворотки. ПСА был экстрагирован из сыворотки, расщеплён трипсин и количественно определён пептид LSEPAELTDAVK.

Абсолютный количественный анализ осуществляется с помощью жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии с использованием автоматического дозатора CTC Analytics HTC PAL (LEAP Technologies; Каррборо, штат Северная Каролина, США; www.leaptec.com), двухуровневой системы нагнетания Shimadzu 10-AD (Shimadzu Scientific Instruments; Колумбия, штат Мэриленд, США) и трехквадрупольного масс-анализатора API 5000 (AB SCIEX; Фрамингем, штат Массачусетс, США). Подтверждение клинической ценности и сравнение с двумя иммунологическими анализами проводились с использованием аликвот замороженной сыворотки от 100 мужчин, перенесших биопсию простаты (50 отрицательных, 50 с раком) и 5 серийных образцов, взятых с течением времени от пяти мужчин с раком простаты на поздней стадии.

Эффективность экстракции антител составила более 99%. Анализ имел аналитический диапазон от 1,2 до 76 нг/мл, точность варьировалась в пределах от 8,6% при 1,5 нг/мл до 5,4% при 27 нг/мл. Масс-спектрометрический анализ хорошо коррелировал с двумя коммерческими иммунологическими анализами. Все три анализа показали статистически эквивалентное отделение случаев рака простаты от доброкачественных заболеваний с помощью графика зависимости чувствительности от частоты ложноположительных заключений.

Авторы пришли к выводу, что их МС-анализы являются первыми потенциальными ссылочными анализами масс-спектрометрии, которые измеряют те же типы ПСА, что и коммерческие иммунологические тесты. Эти тесты могут производить надежный количественный анализ концентрации ПСА в мужской сыворотке, хорошо согласующийся с существующими иммунологическими анализами, и эти анализы могут контролироваться международными ПСА-стандартами для белка и, таким образом, делают измерительную систему неполной. Еще одним преимуществом их иммунной экстракции является увеличение относительной концентрации ПСА, возникающее, когда пептиды из ПСА в большем образце сыворотки повторно суспендируют в небольшом буферном объеме инъекции для МС. Это увеличение концентрации помогает повысить надежность МС-анализа. Исследование было опубликовано в октябре 2014 г. в выпуске журнала Archives of Pathology & Laboratory Medicine.

Ссылки по теме:
Mayo Clinic College of Medicine
LEAP Technologies
AB SCIEX