Для обнаружения антител при диагностике трахомы разработан иммунохроматографический анализ на тест-полосках
By LabMedica International staff writers Posted on 02 Sep 2016 |
Иммунохроматографический анализ на тест-полосках: результаты иммунохроматографического анализа на тест-полосках, выполненного с положительным (слева) и отрицательным (справа) контрольным образцом сыворотки крови (фото любезно предоставлено IHRC).
Трахома, возникающая вследствие рецидивирующей инфекции, вызванной бактерией Chlamydia trachomatis, является основной инфекционной причиной слепоты во всем мире. Ослепляющая трахома представляет собой проблему общественного здравоохранения, которую необходимо окончательно устранить к 2020 году.
Иммунохроматографический анализ на тест-полосках был разработан для обнаружения антител против иммунодоминантного антигена Pgp3 бактерии Chlamydia trachomatis, возбудителя урогенитальной хламидийной инфекции и трахомы глаз.
Ученые из IHRC, Inc. (Центры по контролю и профилактике заболеваний, Атланта, штат Джорджия, США) и их коллеги собирали образцы сыворотки крови от группы населения в Непале в 2000, 2002 или 2014 году по программе эпидемиологического надзора за развитием трахомы по данным серологического скрининга в результате массового применения лекарственных средств. В исследовании участвовали 432 непальца, возраст которых составлял от 1 года до 90 лет в группе. Также были собраны дополнительные образцы со всего мира, включая сухие капли крови, взятые у 1-9-летних жителей Танзании, из которых была извлечена сыворотка.
Иммунохроматографический анализ на тест-полосках был приготовлен с использованием конъюгированных реагентов, и реагенты захвата были приготовлены при оптимальных условиях. Для реагентов захвата 1.5 мг/мл белка Pgp3 и биотинилированного бычьего сывороточного альбумина были распределены соответственно на тестовую и контрольную линии из нитроцеллюлозной мембраны в количестве 0.1 мкл/мм, используя диспенсер IsoFlow (компания Imagene Technology, Ганновер, штат Нью-Гэмпшир, США). Проявляющий реагент, или конъюгат, был приготовлен путем соединения Pgp3 с частицами золота InnovaCoat Gold (компания Innova Biosciences, Кембридж, Великобритания).
Исследователи обнаружили, что оптимизация концентрации Pgp3 на тестовой линии и реагенты захвата, соединенные с коллоидным золотом, при использовании положительных контрольных проб показали самый сильный сигнал тестовой линии при использовании сочетания Pgp3-коллоидное золото и 1.5 мг/мл Pgp3 в качестве реагента захвата. Иммунохроматографический анализ на тест-полосках давал положительные сигналы с сывороткой и цельной кровью, но не с сухими каплями крови. Для сыворотки крови согласованность иммунохроматографического анализа на тест-полосках с мультиплексным анализом, не являющимся референсным, составляла 96%, специфичность при использовании сыворотки крови детей из неэндемичных областей составляла 100%, и межэкспертная согласованность была очень высокой. Для цельной крови согласованность иммунохроматографического анализа на тест-полосках с мультиплексным анализом составляла 81.5%, специфичность составляла 100%, и межэкспертная согласованность была также высокой. Иммунохроматографический анализ на тест-полосках был протестирован в полевых условиях и показал результаты, аналогичные тем, которые были получены при тестировании в лаборатории.
Авторы пришли к заключению, что полученные ими результаты демонстрируют успешную разработку иммунохроматографического анализа на тест-полосках для обнаружения антител против Pgp3 с надежным использованием в полевых условиях, что могло бы сделать тестирование на основе антител для наблюдения за развитием трахомы высокопрактичным, особенно после прекращения программ устранения трахомы. Исследование было опубликовано в журнале Journal of Immunological Methods, в выпуске за август 2016 года.
Ссылки по теме:
IHRC
Imagene Technology
Innova Biosciences
Иммунохроматографический анализ на тест-полосках был разработан для обнаружения антител против иммунодоминантного антигена Pgp3 бактерии Chlamydia trachomatis, возбудителя урогенитальной хламидийной инфекции и трахомы глаз.
Ученые из IHRC, Inc. (Центры по контролю и профилактике заболеваний, Атланта, штат Джорджия, США) и их коллеги собирали образцы сыворотки крови от группы населения в Непале в 2000, 2002 или 2014 году по программе эпидемиологического надзора за развитием трахомы по данным серологического скрининга в результате массового применения лекарственных средств. В исследовании участвовали 432 непальца, возраст которых составлял от 1 года до 90 лет в группе. Также были собраны дополнительные образцы со всего мира, включая сухие капли крови, взятые у 1-9-летних жителей Танзании, из которых была извлечена сыворотка.
Иммунохроматографический анализ на тест-полосках был приготовлен с использованием конъюгированных реагентов, и реагенты захвата были приготовлены при оптимальных условиях. Для реагентов захвата 1.5 мг/мл белка Pgp3 и биотинилированного бычьего сывороточного альбумина были распределены соответственно на тестовую и контрольную линии из нитроцеллюлозной мембраны в количестве 0.1 мкл/мм, используя диспенсер IsoFlow (компания Imagene Technology, Ганновер, штат Нью-Гэмпшир, США). Проявляющий реагент, или конъюгат, был приготовлен путем соединения Pgp3 с частицами золота InnovaCoat Gold (компания Innova Biosciences, Кембридж, Великобритания).
Исследователи обнаружили, что оптимизация концентрации Pgp3 на тестовой линии и реагенты захвата, соединенные с коллоидным золотом, при использовании положительных контрольных проб показали самый сильный сигнал тестовой линии при использовании сочетания Pgp3-коллоидное золото и 1.5 мг/мл Pgp3 в качестве реагента захвата. Иммунохроматографический анализ на тест-полосках давал положительные сигналы с сывороткой и цельной кровью, но не с сухими каплями крови. Для сыворотки крови согласованность иммунохроматографического анализа на тест-полосках с мультиплексным анализом, не являющимся референсным, составляла 96%, специфичность при использовании сыворотки крови детей из неэндемичных областей составляла 100%, и межэкспертная согласованность была очень высокой. Для цельной крови согласованность иммунохроматографического анализа на тест-полосках с мультиплексным анализом составляла 81.5%, специфичность составляла 100%, и межэкспертная согласованность была также высокой. Иммунохроматографический анализ на тест-полосках был протестирован в полевых условиях и показал результаты, аналогичные тем, которые были получены при тестировании в лаборатории.
Авторы пришли к заключению, что полученные ими результаты демонстрируют успешную разработку иммунохроматографического анализа на тест-полосках для обнаружения антител против Pgp3 с надежным использованием в полевых условиях, что могло бы сделать тестирование на основе антител для наблюдения за развитием трахомы высокопрактичным, особенно после прекращения программ устранения трахомы. Исследование было опубликовано в журнале Journal of Immunological Methods, в выпуске за август 2016 года.
Ссылки по теме:
IHRC
Imagene Technology
Innova Biosciences